Question

45). O desenho de oligonucleotídeos para reação de PCR deve seguir algumas orientações técnicas, visando garantir o sucesso da amplificação. Dentre as alternativas, selecione aquela que corresponde a uma orientação INCORRETA:

a) O conteúdo de CG deve estar entre 40 e 60%.

o

b) A temperatura dos iniciadores deve estar entre 52 e 58 C, salvo em reações de

PCR não usuais.

c) Os iniciadores (primers) devem conter entre 18 e 22 nucleotídeos.

d) Mais de três guaninas ou citosinas devem ser, preferencialmente, colocadas nos últimos cinco nucleotídeos da ponta 3’ dos iniciadores. e) Evitar a capacidade de dimerização dos primers e formação de grampos em

único primer.

No laboratório de pesquisa, o técnico deverá proceder à extração do RNA total de folhas jovens de uma espécie vegetal. Normalmente, o RNA é degradado pela enzima RNAse, que pode estar presente no próprio tecido, como também pode ser oriunda de contaminação externa. As seguintes sentenças indicam procedimentos que visam minimizar a degradação do RNA. Assinale a alternativa INCORRETA:

Accepted Answer

B) Aquecer as amostras biológicas antes da extração por 15 minutos a 80 C.

Answer

A) Utilizar proteínas que podem ser obtidas de empresas de biologia molecular, que impedem a ação das RNAse por inibir a função catalítica destas enzimas. o

Answer

C) Nas soluções preparadas para a extração de RNA, utilizar DEPC (dietil pirocarbonato). o

Answer

D) Expor a vidraria a ser utilizada durante a extração a temperaturas de 200 C por 3 horas.

Answer

E) Trabalhar sempre com luvas, durante a manipulação das amostras.

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