Question

Leia o texto e observe o esquema a seguir. Através da PCR, uma sequência de DNA pode ser amplificada milhões ou bilhões de vezes, produzindo cópias suficientes de DNA para serem analisadas por outras técnicas, tais como por sequenciamento, ou digerido por enzimas de restrição e clonado em um plasmídeo. Existem recomendações específicas para a construção de primers, tais como: 1- estabelecer o tamanho entre 18 e 24 bases; 2- assegurar relação entre bases purinas e pirimidinas entre 40 e 60%; 3- procurar sequência do primer com maior concentração de bases G/C na extremidade 5’ e menor concentração (um C ou um G) na porção 3’; 4- evitar trincas de bases repetidas; 5- evitar complementariedade inter e intramolecular, principalmente na extremidade 3’; 6- construir um arranjo de bases que permita uma temperatura de anelamento entre 52 °C e 65 °C, sendo crucial que as temperaturas de fusão dos dois primers sejam próximas.

Figura da questão (imagem do caderno de prova)

Fontes: https://ppgca.evz.ufg.br/up/67/o/Dissertacao2005_Paula_Fernandes.pdf; https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chainreaction-pcr (Adaptado) Assinale a alternativa que indica a CORRETA associação das recomendações específicas para a construção dos primers (em números arábicos no texto -1 a 6) com seus respectivos motivos.

Accepted Answer

B) 1- Para minimizar o risco de anelamentos inespecíficos. 2- para a maximização da especificidade da reação, evitando uma concentração de bases G/C inferior a 50%, de forma a não prejudicar o cálculo da temperatura de anelamento. 3- para facilitar a hibridação. 5- para impedir formação de estruturas secundárias, como a ocorrência de dímeros.

Answer

A) 1- Para anular o risco de anelamentos inespecíficos. 2- para a maximização da especificidade da reação, evitando uma concentração de bases G/C inferior a 50%, de forma a não prejudicar o cálculo da temperatura de extensão. 3- para impedir a hibridação. 4- para auxiliar a formação de estruturas secundárias, como a ocorrência de dímeros.

Answer

C) 2- Para minimizar a especificidade da reação, evitando uma concentração de bases G/C superior a 40%, de forma a não prejudicar o cálculo do Ph de hibridação. 3- para impedir a hibridação. 4- para minimizar o risco de anelamentos inespecíficos. 5- para auxiliar formação de estruturas secundárias, como a ocorrência de alças.

Answer

D) 2- Para minimizar a especificidade da reação, promovendo uma concentração de bases G/C superior a 60%, de forma a não prejudicar o cálculo do Ph de hibridação. 3- para impedir a hibridação. 4- para anular o risco de anelamentos específicos. 6- para auxiliar na formação de estruturas terciárias, como a ocorrência de alças.

Answer

E) 3- Para facilitar a hibridação. 4- para impedir a formação de estruturas terciárias, como a ocorrência de alças. 5- para minimizar o risco de anelamentos específicos. 6- para a maximização da especificidade da reação, promovendo uma concentração de bases G/C inferior a 20%, de forma a não prejudicar o cálculo da temperatura de desnaturação.

Mais questões de PCR – Reação em cadeia da polimerase