Question

Pretende-se clonar determinado gene e para isto será preciso amplificar a sua região codante, utilizando um par de primers ou oligonicleotídeos, sendo o primer A “forward” e o primer B reverso. A sequência desse gene já é conhecida e estão disponíveis no Genebank tanto a sequência completa do gene a nível de DNA, quanto o seu c-DNA. Em vista do texto apresentado, assinale a alternativa INCORRETA. 9

Accepted Answer

C) O primer reverso deve ter, pelo menos, o dobro do tamanho do primer “forward” para que a reação de amplificação possa funcionar corretamente.

Answer

A) O primer reverso será desenhado a partir da fita positiva 5’-3’ do DNA, sendo que sua sequência 5’-3’ será complementar àquela da fita positiva, em orientação invertida.

Answer

B) Para desenhar o primer “foward” você precisará identificar o primeiro ATG da sequência codante desse gene e selecionará 10-20 nucleotídeos, a partir deste ponto, no sentido 5’-3’.

Answer

D) A temperatura de anelamento (tm) a ser utilizada na sua reação de PCR será determinada a partir do número de bases C/G presentes na sequência de cada primer.

Answer

E) A fim de obter uma amplificação com alto grau de fidedignidade, é recomendado que se utilize uma Taq polimerase que tenha função revisora e corretora de nucleotídeos durante a síntese.

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