Question

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A possibilidade de utilização do sistema CRIS- PR/Cas9 para fusão de proteínas marcadoras pode tornar os ensaios de avaliação de expressão e localização celular de proteínas mais simples e confiáveis. Neste contexto, assinale a alternativa INCORRETA entre as opções a seguir.

Accepted Answer

B) Sistemas de expressão exógena de fusão de proteína de estudo e proteínas marcadoras fluorescentes (como os obtidos por vetores retrovirais e lentivirais) são a melhor opção para o estudo da distribuição celular das proteínas, pois estes ensaios demandam a expressão do maior nível possível da proteína a ser caracterizada.

Answer

A) A fusão gênica da proteína fluorescente à proteína endógena permite avaliar a proteína endógena de forma mais confiável, pois seus níveis de expressão serão regulados pelos elementos naturais de regulação gênica para aquele gene.

Answer

C) Pode-se utilizar sinais de autoclivagem de proteínas para liberar a proteína endógena da proteína fluorescente, caso a fusão das duas modifique o padrão de localização celular da proteína de estudo.

Answer

D) O uso de proteínas fluorescentes fusionadas à proteína de estudo torna o ensaio mais rápido e fidedigno, pois evita processamentos posteriores (como a realização de colorações por imuno-histoquímica) que podem gerar artefatos no sistema.

Answer

E) A geração de células com a fusão gênica da sequência codificante de estudo e a sequência da proteína repórter normalmente deve ser realizada em um clone celular, depois validada e então aplicada em ensaios de triagem de alta vazão.

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