Question

No diagnóstico clínico-molecular, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pode ser utilizada para a avaliação da carga viral ou bacteriana, para a determinação da resistência a antibióticos e, até mesmo, para o prognóstico de tumores malignos. A figura abaixo apresenta ciclos de amplificação de amostras por PCR em tempo real, sendo (A) uma amplificação de um determinado segmento gênico que identifica um determinado marcador tumoral em células neoplásicas e (B) uma amplificação do mesmo segmento gênico em células não neoplásicas.

Figura da questão (imagem do caderno de prova)

Threshold 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Ciclos NASCIMENTO, S.; SUAREZ, E. R. ; PINHAL, M. A. S. Tecnologia de PCR e RT-PCR em tempo real e suas aplicações na área médica. Revista Brasileira de Medicina, Especial Oncologia, São Paulo, v. 67, p. 7-19, nov. 2010 (adaptado). A partir das informações apresentadas, conclui-se que

Accepted Answer

A) o Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra.

Answer

B) o aumento da fluorescência indica que a amplificação da sequência alvo está ocorrendo, pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla fita, ocorre liberação da fluorescência.

Answer

C) a linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase exponencial da amplificação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais positivos por contaminação das amostras por DNA genômico.

Answer

D) a análise comparativa das duas amostras deve ser realizada a partir da estabilização da amplificação, que ocorre na fase platô, sendo alcançada no ciclo 28 para a amostra A, e no ciclo 40, para a amostra B.

Answer

E) o maior Ct (26) é observado no início da fase exponencial de amplificação em células não neoplásicas (B), e indica maior expressão comparativamente às células neoplásicas (B), que apresentam Ct = 17, não sendo esta sequência alvo um bom marcador tumoral.

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