Question

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Sobre a reação da polimerase em cadeia (PCR) convencional e em tempo real, assinale a alternativa INCORRETA.

Accepted Answer

A) A detecção da fluorescência durante a reação da polimerase em cadeia em tempo real (PCR em tempo real) é baseada exclusivamente na utilização do intercalante de DNA Syber Green ou intercalantes similares, não havendo a possibilidade de utilização de sondas de DNA específicas para um determinado gene.

Answer

B) No PCR em tempo real é possível comparar a expressão de um gene regulado, isto é, aquele cuja expressão varia ao longo do tempo, a partir do processo de normalização com um gene constitutivo, isto é, um gene cuja expressão não varia ao longo do tempo ou tratamento.

Answer

C) No PCR, na primeira etapa do ciclo, a temperatura é elevada a 94°C para a separação da fita dupla de DNA. Após o anelamento dos primers em temperatura reduzida, na última etapa do ciclo, a temperatura é elevada a 72°C para que a enzima Taq polimerase possa realizar a extensão; em seguida um novo ciclo é iniciado. Normalmente, são realizados de 25 a 40 ciclos para cada reação.

Answer

D) Dentre as diversas aplicações do PCR destacam-se o teste de paternidade, o diagnóstico de doenças infecciosas e a amplificação de genes oriundos de bibliotecas de cDNAs.

Answer

E) Após a realização do PCR convencional, a eletroforese em agarose é o método mais utilizado para visualização dos fragmentos de DNA. Após a corrida eletroforética, o gel é corado com brometo de etídeo ou substância similar intercalante de DNA e observado em transiluminador.

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