Question

Em um laboratório de biologia molecular, um Biomédico está padronizando um ensaio de PCR em tempo real (qPCR) utilizando sondas TaqMan para a detecção de um patógeno respiratório. Durante a reação, ele observou que a fluorescência aumenta proporcionalmente à quantidade de DNA amplificado. Sobre o princípio molecular desta técnica, assinale a afirmativa correta.

Accepted Answer

A) A sonda possui um fluoróforo e um quencher, e a atividade exonuclease 5'-3' da Taq polimerase cliva a sonda durante a extensão, gerando o sinal de fluorescência.

Answer

B) A sonda TaqMan atua como um primer iniciador e só emite a sua fluorescência quando se encontra intercalada na dupla fita de DNA recém-sintetizada.

Answer

C) O aumento da fluorescência ocorre porque a Taq polimerase tem atividade transcriptase reversa, que ativa o fluoróforo já ligado ao molde de RNA.

Answer

D) A sonda contém moléculas de SYBR Green que são clivadas por enzima de restrição, liberando energia luminosa proporcional ao número total de ciclos.

Answer

E) A atividade exonuclease 3'-5' da Taq polimerase degrada o quencher da sonda e mantém o fluoróforo intacto na fita molde para uma emissão contínua.

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