Question

No ensaio de PCR em tempo real (qPCR), a quantificação absoluta ou relativa de um ácido nucleico alvo não depende apenas da amplificação exponencial, mas da correlação entre a massa inicial do molde e a cinética de fluorescência observada durante a reação. Considerando os princípios do monitoramento dos produtos da reação, no PCR em tempo real, qual parâmetro é fundamental para permitir a quantificação precisa e por que ele é utilizado?

Accepted Answer

E) O ciclo de quantificação (Cq ou Ct), que representa o ciclo em que a fluorescência excede o ruído de fundo (threshold), sendo inversamente proporcional ao logaritmo da concentração inicial do alvo. Execução: Fundatec 26 – MEDICINA VETERINÁRIA: MICROBIOLOGIA

Answer

A) O ponto de saturação (plateau), pois reflete a concentração máxima de amplicons gerados quando os reagentes (dNTPs e polimerase) se tornam limitantes.

Answer

B) A temperatura de melting (Tm), que permite quantificar o DNA alvo com base na estabilidade térmica da dupla-fita, independentemente da eficiência da polimerase.

Answer

C) O uso de primers degenerados, que aumentam a sensibilidade da detecção ao permitir que a fluorescência seja emitida mesmo em variantes genéticas do alvo.

Answer

D) O nível de fluorescência basal medido nos primeiros ciclos, pois sua amplitude é diretamente proporcional à quantidade de fluoróforos que se ligam ao DNA molde original antes do início da fase exponencial.

Mais questões de Outros temas