Question

A técnica de PCR (do inglês Polymerase Chain Reaction) foi criada para resolver um grande problema nas análises de DNA: a baixa quantidade de DNA nas células. Essa técnica permite a amplificação de uma região específica do DNA a partir de poucas moléculas (ou mesmo uma única molécula), e, após vários ciclos de amplificação, essa quantidade aumenta de forma exponencial. Considerando os fundamentos desta técnica, é correto afirmar:

Accepted Answer

A) A reação utiliza iniciadores (primers), que são pequenos fragmentos de DNA (entre 17-35 pares de bases, geralmente) complementares às regiões que delimitam a sequência de DNA a ser amplificada.

Answer

B) Para que haja o pareamento dos iniciadores com a região de interesse, ou anelamento, a temperatura da o reação de PCR é elevada a 72 C, quebrando, assim, as pontes de hidrogênio que unem as duas fitas complementares, ou seja, desnaturando o DNA.

Answer

C) A reação foi desenvolvida a partir de uma DNA-polimerase que permanece estável a temperaturas acima de o 100 C, chamada Taq-polimerase, que foi sintetizada em um laboratório de biotecnologia a partir de manipulação gênica de um fungo.

Answer

D) A técnica de RT-PCR é uma variante da PCR convencional que permite a amplificação de sequências a partir de uma molécula de RNA mensageiro, visto que a enzima Taq-polimerase pode amplificar tanto com o DNA quanto com o RNA, contanto que o RNA tenha sequências complementares aos iniciadores.

Answer

E) A PCR ocorre em três etapas: desnaturação (separação das duas fitas complementares); anelamento (ligação dos iniciadores) e extensão (síntese da sequência alvo de DNA). Para que estas diferentes fases o o ocorram, a temperatura da reação varia de 72 C a 92 C, nunca extrapolando esses valores mínimo e máximo.

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