Question

Durante o planejamento de um experimento de RT-qPCR para avaliar a expressão do gene GAPDH em células humanas, uma pesquisadora observou que um dos pares de primers amplificava tanto o DNA genômico quanto o DNA complementar. Outro par de primers, no entanto, produzia um único produto e ausência de amplificação no controle sem transcriptase reversa (-RT). Conforme os princípios empregados para o desenho de primers para amplificação de DNA complementar, assinale a alternativa correta.

Accepted Answer

B) O uso de primers que atravessam a junção éxon-éxon impede a amplificação do DNA genômico, assegurando a detecção exclusiva de transcritos.

Answer

A) Primers desenhados em regiões intrônicas evitam a amplificação de DNA genômico, garantindo especificidade para o cDNA.

Answer

C) A inclusão de regiões ricas em GC nos primers aumenta a eficiência da reação e reduz o risco de amplificação genômica.

Answer

D) Primers com complementaridade parcial a especificidade da reação de qPCR. pseudogenes aumentam a sensibilidade e a

Answer

E) O controle -RT é dispensável quando os primers se localizam totalmente dentro de um éxon, pois o cDNA e o DNA genômico terão tamanhos idênticos de amplificação.

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